不同的抑制劑作用機制不同,有的抑制劑與底物競爭酶的活性中心,從而阻礙底物與酶的結合,稱為競爭性抑制;有的抑制劑與酶活性中心以外的基團結合,使酶的構象改變而不能與底物結合,稱為非競爭性抑制。
酶促化學反應中的反應物稱為底物,一個酶分子在一分鐘內(nèi)能引起數(shù)百萬個底物分子轉化為產(chǎn)物,酶在反應過程中并不消耗。但是酶實際上是參與反應的,只是在一個反應完成后,酶分子本身立即恢復原狀,又能進行下一次反應。許多實驗證明,酶和底物在反應過程中形成絡合物。
固定劑與甲醛不同,戊二醛的這一步反應是不可逆的,而且需要氧氣的參與。由于大塊的樣品內(nèi)部氧氣供應不足,戊二醛在大塊樣品的內(nèi)部無法形成穩(wěn)定的生成物,會導致樣品內(nèi)部的固定效果不佳。因而在使用戊二醛固定時,小塊的樣品固定效果較為理想。戊二醛通過交聯(lián)作用固定蛋白質(zhì)的過程會伴隨氫離子的釋放,使樣品pH值降低。為了維持pH值穩(wěn)定在最佳水平,在戊二醛的固定劑中要加入足量的緩沖液。
鐵染色原理:人體內(nèi)有一定量的以鐵蛋白和含鐵血黃素形式貯存的鐵元素,這些鐵在酸化的低鐵氰化鉀溶液中反應,生成藍色的亞鐵氰化鐵沉淀(普魯士藍),定位于含鐵的部位。
酶固定化后一般穩(wěn)定性增加,易從反應系統(tǒng)中分離,且易于控制,能反復多次使用。便于運輸和貯存,有利于自動化生產(chǎn),但是活性降低,使用范圍減小,技術還有發(fā)展空間。固定化酶是近十余年發(fā)展起來的酶應用技術,在工業(yè)生產(chǎn)、化學分析和醫(yī)藥等方面有誘人的應用前景。